African swine fever detection instrument operation method

　　非洲豬瘟檢測(cè)儀器操作方法

　　非洲豬瘟檢測(cè)儀器用于運(yùn)行病毒檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，并對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析;儀器既可在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)操作，又可用于野外科學(xué)實(shí)驗(yàn)，配合相應(yīng)試劑，對(duì)取自待檢測(cè)樣本的分析物或其他分析物中的目標(biāo)核酸進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的定性檢測(cè)。

　　非洲豬瘟檢測(cè)儀器提前準(zhǔn)備工作

　　1.請(qǐng)?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出**盒，平衡至室溫。

　　2.從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正常現(xiàn)象;放置室溫，輕搖均勻，待結(jié)晶*溶解后再配置洗滌液。可將20ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液，未用完的放回4℃

　　3.20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

　　非洲豬瘟檢測(cè)儀器實(shí)驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材：

　　1.檢測(cè)儀(450nm)

　　2.高精度加樣器及**頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

　　3.37℃恒溫箱或水浴鍋

　　4.蒸餾水或去離子水

　　非洲豬瘟快速檢測(cè)儀樣本處理及要求：

　　1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

　　2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或**鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

　　3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

　　4.非洲豬瘟檢測(cè)儀器培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)**內(nèi)的成份時(shí)，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋**懸液，**濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使**破壞并放出**內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

　　5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

　　非洲豬瘟檢測(cè)儀器操作方法

　　1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

　　2.設(shè)置陰、陽性對(duì)照孔和樣本孔，陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照各50μL;

　　3.待測(cè)樣本孔加待測(cè)樣本10μL，樣本稀釋液40μL;

　　4.非洲豬瘟檢測(cè)儀器隨后陰、陽性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗原100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

　　5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

　　6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光水浴鍋孵育15min。

　　7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在非洲豬瘟快速檢測(cè)儀450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。